Technische gegevens
Kolom/ontziltingsplaat sephadex g-25 gebruiksaanwijzing
Productintroductie
Dextran G-25 ontziltingskolom/-plaat maakt voornamelijk gebruik van de moleculaire zeeffunctie in zijn gelpolymeerverbindingen van dextran met een netwerkstructuur. Vanwege de verschillende molecuulgewichten van de gescheiden stoffen, worden de stoffen met een hoog molecuulgewicht (zoals eiwitten) buiten de geldeeltjes geblokkeerd wanneer de gescheiden stoffen door de G-25-gel passeren en stromen ze weg via de opening tussen de geldeeltjes. Het proces is kort en de bewegingssnelheid hoog, waardoor de stoffen met een hoog molecuulgewicht als eerste uit de kolom/plaat stromen. Stoffen met een laag molecuulgewicht (bijv. zouten) kunnen in de microporiën van geldeeltjes doordringen. Het proces is lang en traag, terwijl stoffen met een hoger molecuulgewicht langer nodig hebben om uit de gelkolom/-plaat te stromen, waardoor ze uiteindelijk worden uitgespoeld en zo worden gescheiden.
De parameters van de media uit de Sephadex G-25-serie worden weergegeven in de tabel
| Project | parametrisch |
| Functies | Vuilwitte gel |
| Gemiddelde deeltjesgrootte (droog) | 150±100μm 92,8 |
| Deeltjesgrootteverdeling (45-165 μm)% | ≥80 |
| Split Range (Portugees) | 100-5000 |
| Scheidingsbereik (globuline) | 1000-5000 |
| Waterverhouding (ml natte lijm/g droog poeder) | 2.3-2.7 |
| Lineaire stroomsnelheid (0,3 MPA, cm/u) | 697.1 |
| Maximale stroomsnelheid (cm/u) | 150 |
| Conserveringsoplossing | 0,2M NaAc 20 procent ethanol |
| opslagomstandigheden | 4'C-30'C |
Het modelnummer G geeft aan hoeveel water er per gram gel wordt opgenomen. Zo geeft het G-25-gelmedium aan dat er 2,5 ml water per gram droge gel wordt opgenomen. Dit is de gel-uitzettingscoëfficiënt, wat ook de poriegrootte van de geldeeltjes is.
Chromatografiemedia uit de Sephadex G-25-serie worden veelvuldig gebruikt voor bufferuitwisseling, ontzilting van eiwitten, scheiding van eiwitten met verschillende moleculaire gewichten, enz. Het maximale monstervolume voor ontzilting en buffering kan oplopen tot 30% van het kolombedvolume.
Werkstroom
1. Balanceren van de luidspreker/tablet: Zodra de luidspreker/tablet met de voorgeladen G-25 Sefadex rechtop staat, balanceert u de G-25-ontzoutingskolom/tablet met een buffer die 5 tot 10 keer zo groot is als het volume van de kolomlaag. (Let op: buffer is de gewenste buffer om te vervangen, bijvoorbeeld PBS, gedeïoniseerd water, enz.; wees voorzichtig en controleer de stroomsnelheid)
2. Monstername: Nadat de gelkolom/-plaat in evenwicht is gebracht met de buffer, pipetteer je het monster en voeg je het langzaam toe aan de zeef op het geloppervlak. Open de onderste dop en laat het monster langzaam in de gel stromen totdat het gelijk ligt met de gel. (Let op: het monstervolume op de bodem is doorgaans 10-30% van het volume van de kolomlaag. De viscositeit van het monster mag niet te hoog zijn, anders wordt de levensduur van de G25-klier verkort).
3. Elutie: Het monster wordt geëlueerd met een elutiebuffer nadat het volledig in de gel is opgenomen. (Opmerking: de aanbevolen monsterstroomsnelheid is ongeveer 1-2 ml/min. Het elutievolume is gewoonlijk 1,2-2,0 keer het monstervolume).
4. Zuivering en regeneratie: Sommige eiwitten worden gedenatureerd in zoutoplossing, dus het kan nodig zijn om deze eiwitten te zuiveren door het kolombed te wassen met 0,2 M NaOH of een ander niet-ionisch reinigingsmiddel.
5. Bewaren: Na het experiment bewaren in een 0,02% natriumazide-oplossing of een 20% ethanoloplossing.