Technische gegevens
Instructies voor het gebruik van kolommen/platen voor ontzilting c18
Productintroductie
C18-ontzoutingskolommen/-platen zijn gevuld met een C18-silicagelmatrix, waarvan de functionele groep, octadecyl, een hoge hydrofobiciteit en uitstekende retentie-eigenschappen voor apolaire verbindingen heeft. C18-ontzoutingskolommen/-platen kunnen primer-/oligo-/DNA-moleculen met DMT adsorberen zonder zoutretentie, wat resulteert in primer-/oligo-/DNA-producten met een hoge zuiverheid.
Selectiegids
BM Life Sciences biedt C18-ontzoutingskolommen/-platen in verschillende formaten aan. U kunt de juiste ontzoutingskolom kiezen op basis van de primer-/oligoconcentratie. Voor batchverwerking kunt u kiezen voor een 96-wells ontzoutingsplaat.
| Productnummer | norm | Toepasselijke oligonucleotide-specificaties | Referentiestappen |
| SPEC18W150 | 50 mg/1 ml | 10nmol - 200nmol | Stap 5 |
| SPEC18W3100 | 100 mg/3 ml | 10nmol - 600nmol | Stap 1 |
| SPEC18W3300 | 300 mg/3 ml | 10nmol - 2 .opmol | Stap 2 |
| SPEC18W61000 | 1 g/6 ml | 1 umol - 6 umol | Stap 3 |
| SPEC18W9630 | 30mg/96 wells plaat | 5nmol - 100nmol | Stap 4 |
| SPEC18W9650 | 50mg/96 wells plaat | 10nmol - 200nmol | Stap 4 |
| SPE15C18W9680 | 80 mg/96-wells plaat (1,5 ml 96-wells plaat) | 10nmol - 500nmol | Stap 5 |
| SPE23C18W9680 | 80 mg/96-wells plaat (2,3 ml 96-wells plaat) | 10nmol - 500nmol | Stap 5 |
Opmerking
De C18-reinigingskolom/plaat kan ook worden gebruikt voor het ontzouten van ruwe producten en primers/oligo's na HPLC- en PAGE-zuivering. Zie stap 5 voor meer informatie.
Reagens
Acetonitril chromatografische kwaliteit
0,1 M THEE, PH7,0
0,5 M NaCl
Spoeloplossing (5% acetonitril opgelost in 0,5 M Nacl)
3% trifluorazijnzuur (TFA)
Gedeïoniseerd water
20% acetonitril
TE-buffer: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Stap 1
Monsterbereiding
Voeg 0,5 M NacI toe aan het oligonucleotidemonster tot een volume van 2 ml.
Activering van de ontziltingskolom
Activering: 1 ml acetonitril werd gebruikt om de kolom te activeren.
Equilibrering: Breng de kolom in evenwicht met 1 ml 0,1 M TEAA-oplossing (PH 7,0).
Reinigingsproces
1. Laat 2 ml van de oligonucleotide-bevattende oplossing door een ontziltingskolom stromen.
2. Spoel de kolom 2 keer met 1 ml spoeloplossing om mislukte sequenties te verwijderen.
3. Spoel de kolom 2 keer met 1 ml gedemineraliseerd water om zouten te verwijderen.
4. Spoel de kolom 2 keer met 1 ml 3% trifluorazijnzuur om DMT te verwijderen en observeer dat de geadsorbeerde laag oranjerood kleurt; en
5. Spoel de ontzoutingskolom tweemaal met 1 ml gedemineraliseerd water om trifluorazijnzuur en resterende zouten te verwijderen.
6. Voeg 1 ml 20% acetonitril toe en zet alles in elkaar.
Stap 2
Monsterbereiding
Voeg 0,5 M NacI toe aan het oligonucleotidemonster tot een volume van 4 ml.
Activering van de ontziltingskolom
Activering: 2 ml acetonitril werd gebruikt om de kolom te activeren.
Equilibrering: Breng een 2 ml kolom in evenwicht met 0,1 M TEAA (pH 7,0).
Reinigingsproces
1. Laat 4 ml van de oligonucleotidenoplossing door een ontziltingskolom lopen.
2. Spoel de kolom 2 keer met 2 ml spoeloplossing om mislukte sequenties te verwijderen.
3. Spoel de kolom 2 keer met 2 ml gedemineraliseerd water om zouten te verwijderen ;)
4. Spoel de kolom 2 keer met 2 ml 3% trifluorazijnzuur om DMT te verwijderen. De adsorptielaag is oranje-rood gekleurd.
5. Spoel de kolom tweemaal met gedemineraliseerd water, waarbij u telkens 2 ml gedemineraliseerd water gebruikt, om trifluorazijnzuur en resterende zouten te verwijderen.
6. Giet 2 ml 20% acetonitril en zet alles in elkaar.
Stap 3
Monsterbereiding
Voeg 0,5 M Nac toe aan het oligonucleotidemonster tot een volume van 10 ml.
Activering van de ontziltingskolom
Activering: Er werd 5 ml acetonitril gebruikt om de kolom te activeren.
Equilibrering: De kolom werd in evenwicht gebracht met 10 ml 0,1 m TEAA (pH 7,0).
Reinigingsproces
1. 10 ml oplossing met oligonucleotiden werd door een ontziltingskolom geleid.
2. De kolom werd tweemaal gewassen met 5 ml spoeloplossing om niet-geslaagde sequenties te verwijderen.
3. Spoel de kolom tweemaal met 5 ml gedemineraliseerd water om zouten te verwijderen.
4. Was de kolom tweemaal met 5 ml 3% trifluorazijnzuur om DMT te verwijderen. U zult zien dat de adsorptielaag oranje-rood is geworden.
5. Spoel de kolom tweemaal met 5 ml gedemineraliseerd water om trifluorazijnzuur en zoutresten te verwijderen.
6. Giet 5 ml 20% acetonitril af en verzamel dit.
Stap 4
Monstervoorbereiding
Voeg 0,5 M Nacl toe aan het oligonucleotidemonster tot een volume van 0,5 ml.
Activering van 96-wells plaat
Activering: 0,5 ml acetonitril werd door elke put van een 96-wellsplaat geleid.
Evenwicht: Breng een 96-wellsplaat in evenwicht met 0,5 ml 0,1 M TEAA-oplossing (pH 7,0).
Reinigingsprocedure
1. Giet 0,5 ml oligonucleotide-bevattende oplossing door een 96-wellsplaat.
2. Spoel de 96-wellsplaat tweemaal met 0,5 ml wasoplossing om slechte sequenties te verwijderen.
3. Spoel de 96-wellsplaat tweemaal met 0,5 ml gedemineraliseerd water om zouten te verwijderen.
4. Was de 96-wellsplaat tweemaal met 0,5 ml 3% trifluorazijnzuur om DMT te verwijderen en observeer dat de adsorptielaag oranjerood kleurt; en
5. Spoel de 96-wellsplaat tweemaal met 0,5 ml gedemineraliseerd water om trifluorazijnzuur en zoutresten te verwijderen.
6. Voeg 0,5 ml 20% acetonitril toe en verzamel het materiaal.
Stap 5
Monstervoorbereiding
Voeg 0,5 M Nacl toe aan het oligonucleotidemonster tot een volume van 1,2/2 ml.
Activering van 96-wells plaat
Activering: Giet 1-4 ml 0,5 ml acetonitril in elke well van een 96-wellsplaat.
Equilibrering: Breng een 96-wellsplaat in evenwicht met 1-4 ml van een 0,5 ml 0,1 M TEAA-oplossing (pH 7,0).
Reinigingsproces
1. Giet 0,5-2 ml oligonucleotide-bevattende oplossing door een 96-wellsplaat.
2. Spoel de 96-wellsplaat 2 keer met 1/2 ml wasoplossing om de ongewenste sequenties te verwijderen ;)
3. Spoel de 96-wellsplaat tweemaal met 1/2 ml gedemineraliseerd water om zouten te verwijderen.
4. Was de 96-wellsplaat tweemaal met 1/2 ml 3% trifluorazijnzuur om DMT te verwijderen en observeer dat de adsorptielaag oranje-rood kleurt;
5. Spoel de 96-wellsplaat tweemaal met 1/2 ml gedemineraliseerd water om trifluorazijnzuur en zoutresten te verwijderen.
6. Voeg 1/2 ml 20% acetonitril toe en verzamel het materiaal.
Stap 6
Reagens
Acetonitril chromatografische kwaliteit
0,05 M THEE, PH 7,0
2 M THEE, PH 7,0
Gedeïoniseerd water (voor ontzilting en zuivering van RNA-moleculen zonder RNase) 60% acetonitril (opgelost in water met 0,5% NH4OH)
20% acetonitril (om DNA- of RNA-moleculen te ontzouten na deprotectie)
TE-buffer: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Monsterbereiding
HPLC-gezuiverde oligo: Voeg een geschikte hoeveelheid 0,1 M TEAA toe aan de HPLC-gezuiverde oligo's, zodat de uiteindelijke acetonitrilconcentratie ≤ 5% bedraagt. Gezuiverde oligo's: Los de oligonucleotiden bevattende gelfragmenten op in 0,05 M TEAA, verwijder de gelfragmenten en los de oligo op in ten minste 2 ml 0,1 M TEAA.
Oligos opgelost in NH4OH of AMA: Verdamp tot droog en los op in 2 ml 0,1 M TEAA.
Activeren van de ontziltingspomp
Activering: 1 ml acetonitril werd gebruikt om de kolom te activeren.
Equilibratie: Breng een 1 ml 2 M TEAA-kolom (pH 7,0) in evenwicht.
Oligos-ontziltingsprocedure voor HPLC-zuivering
1. Laat de oplossing met oligonucleotiden door de ontziltingskolom stromen.
2. Spoel de ontziltingskolom tweemaal met 1 ml gedemineraliseerd water om de zouten te verwijderen.
3. Giet door een kolom met 1 ml 60% acetonitril en verzamel.
Oligos-ontzoutingsprocedure gezuiverd door de PAAG-methode
1. Laat de oplossing met oligonucleotiden door de ontziltingskolom stromen.
2. Spoel de ontziltingskolom tweemaal met 1 ml gedemineraliseerd water om de zouten te verwijderen.
3. Giet door een kolom met 1 ml 60% acetonitril en verzamel.
Procedure voor het ontzouten van DNA-oligonen na synthese
1. Leid de oplossing met oligonucleotiden door de ontziltingskolom; en
2. Spoel de 1 ml 0,1 M TEAA-kolom tweemaal om mislukte sequenties te verwijderen.
3. Spoel de ontziltingskolom tweemaal met 1 ml gedemineraliseerd water om de zouten te verwijderen.
4. Laat de kolom door 1 ml 20% acetonitril lopen en zet de kolom weer in elkaar.
Ontzoutingsprocedure van RNA-oligo's na synthese
1. Laat de oplossing met oligonucleotiden door de ontziltingskolom stromen.
2. Spoel de kolom met 2 ml 0,1 M TEAA.
3. Spoel de kolom met 2 ml RNase-vrij water.
4. Laat 2 ml 20% acetonitril (RNase-vrij water) door een kolom lopen, elueer en verzamel. Oligonucleotide-opslag
Oligonucleotiden opgelost in 20% acetonitril en bewaard bij 4°C, voorkomen de groei van micro-organismen en zijn geschikt voor kortdurende opslag.
Oligonucleotiden in een 20% acetonitriloplossing (of opgelost in een alkalische buffer zoals TE) kunnen langdurig worden bewaard bij temperaturen tot wel -20 °C.
Oligonucleotiden in de vorm van gevriesdroogd poeder kunnen lange tijd bewaard worden.
Waarschuwing
De hoeveelheden gebruikte reagentia zijn slechts aanbevelingen en dienen per specifiek geval geoptimaliseerd te worden.
De hoeveelheden gebruikte reagentia zijn slechts aanbevelingen en dienen per geval te worden geoptimaliseerd.
De ontziltingskolom moet voldoende activeringsevenwicht ondergaan om de residuen op de kolom/plaat te elueren en de bindingscapaciteit van de kolom/ontziltingsplaat te verbeteren. De bemonstering van gesynthetiseerde oligonucleotiden moet langzaam gebeuren om te voorkomen dat CPG-poeder in de kolom/plaat terechtkomt voor reiniging en kruisbesmetting.
C18-ontziltingskolommen/-wafers maken gebruik van een silicamatrix. Het toepasbare pH-bereik is 2-7. Bij een pH > 7,5 lost de silicamatrix gemakkelijk op. Bij een pH
Wanneer u TFA gebruikt om DMT te ontzouten, moet u op de tijd letten; te lang zal de purine verwijderd worden.
Wees gehecht
B&M Universal CPG Frits Synthesekolommen Snelle Ontzoutings- en Zuiveringstechnologie
B&M Universal CPG Frits Synthesekolommen Snelle ontziltings- en zuiveringstechnologie:
B&M Universal CPG Frits worden gemaakt van geïmporteerd ultrahoogmoleculair, ultrazuiver polyethyleen en geïmporteerd CPG-poeder. Ze worden verwerkt met een speciale technologie en hebben een goed synthese-effect in de synthesekolom, een lage mutatiesnelheid en een betrouwbare productkwaliteit.
Nadat de synthese in de Dr.Oligo/Mermade synthesizer is voltooid en de ammoniak is opgelost, kan Oligo direct worden geëlueerd naar de synthesekolom. Na dosering en aftappen kan het direct worden gebruikt voor routinematige PCR-reacties zonder extra zuiveringsstappen. Dit is eenvoudig te bedienen, bespaart kosten en zorgt voor een snellere levering!
De specifieke stappen van de operatie zijn als volgt:
1, Synthesis B&M Universal CPG Frits synthetische kolommen/platen/s 400ul, 75% acetonitril ultrazuiver watermengsel tweemaal gewassen om synthetische restreagentia te verwijderen;
2, B&M Universal CPG Frits synthetische ammoniak-ammolyse kolommen/platen, 90°C, 80PSI, ammoniak-ammolyse 2-2,5 uur;
3, 100% acetonitril 400L synthetische waskolom/plaat, tweemaal;
4、90% Acetonitril Ultrazuiver Watermengsel 400ul Wassende Synthetische Kolom/Plaat, Tweemaal, Droogpompen;
5. Geschikt volume eluens voor het elueren van primers op synthetische kolom/plaat. Het eluens kan ultrazuiver water zijn, een mengsel van 3% triethylamine en ultrazuiver water, of een mengsel van ongeveer 20% acetonitril en ultrazuiver water.
6. Elutieoplossing kan worden gemeten, gedoseerd, afgetapt, verpakt en verzonden.